ELISA試劑盒進(jìn)口大鼠以 HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物(HRP Streptavidin Conjugate,
HRP-SA)為基礎(chǔ),可用于檢測(cè)血液,細(xì)胞、組織
CD40抗原。該試劑盒
、特異性強(qiáng)、定性定位 、背景清晰。在所用的 CD40一抗與相
,用生物化二抗與一抗特異性 ,zui后加 HRP-SA,形成抗
應(yīng)靶抗原
原—特異一抗—生物素化二抗—HRP-SA復(fù)合物,顯微鏡下觀察成像。
試劑盒所含試劑:
試劑A 通透液:0.1% Triton-X 100 10 mL(選用)
試劑B 封閉
試劑C (*分裝)已稀釋的即用型CD40一抗(2.5ml)
試劑D (*分裝)生物素化 IgG 1支
(濃度1.5 mg/mL,稀釋 1:300~1:500)50 μL+抗體稀釋液20ml
(封閉用) 20 mL
試劑E HRP-SA復(fù)合物1支(濃度1 μM,稀釋 1:50~1:200)100 μL
試劑F DAB顯色液 5ml
用戶自備試劑:
1. 10mM TBS(pH7.2~7.4)
加蒸餾 800mL,濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4,zui后定容至1000mL
TBS-T:TBS+Tween 20(0.05%體積 )
2.抗原修復(fù)液(依檢測(cè)抗原不同而選擇不同的修復(fù)液)
10mM pH6.0 檸檬酸
檸檬酸0.38g
檸檬酸三鈉2.45g
加蒸餾 900mL,濃鹽酸調(diào)pH值至6.0,該試劑盒以 HRP標(biāo)記zui后定容至1000mL
或:0.5M EDTA修復(fù)液(pH8.0)
EDTA·2H2O 186.1g
加蒸餾 700mL,用10mM NaOH調(diào)pH值至8.0,zui后定容至1000Ml
3. 10 mL
4. Tween 20 5 mL
石蠟包埋組織切片
實(shí)驗(yàn)步驟(建議方案):
石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片
,于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr;
3次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
2.脫蠟: 切片放10 min;
3. : 切片經(jīng)下行酒精 ,無(wú)乙醇2 min;75%乙醇2min,自來(lái)5min,95%乙醇2次(每次2min),85%,ddH2O洗2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫
度達(dá)到98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然 ,自來(lái)
2min,TBS洗滌(2×2min)。
5.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育30 min; ,ddH2O洗2×
1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),直接進(jìn)
6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過(guò)夜;
7.洗滌: TBS-T洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑B,37℃濕盒孵育10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑Tween 20,37℃濕盒孵育封閉20 min;
12.加HRP-SA: 滴加用試劑C稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20 nM),37
℃濕盒中孵育30 min;
13.洗滌: TBS-T洗滌(3×5 min),該試劑盒以 HRP標(biāo)記TBS洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用DAB溶液(試劑F)顯色;
15.復(fù)染:自來(lái),復(fù)染,脫 ,透明;
16.ELISA試劑盒進(jìn)口大鼠封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑封片;
亞油酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品 112-63-0 5×50mg Methyl Linoleate
亞油酯酰聚氧甘油酯標(biāo)準(zhǔn)品 100mg Linoleoyl Polyoxylglycerides
亞洲人參提取物粉標(biāo)準(zhǔn)品 50647-08-0 1.5g Powdered Asian Ginseng Extract
煙酸標(biāo)準(zhǔn)品 59-67-6 200mg Niacin
煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品 98-92-0 500mg Niacinamide (Vitamin B3)
延胡索酸泰妙菌素標(biāo)準(zhǔn)品 55297-96-6 250mg Tiamulin Fumarate
鹽酸阿的平標(biāo)準(zhǔn)品 6151-30-0 200mg Quinacrine Hydrochloride
鹽酸阿法羅定標(biāo)準(zhǔn)品 561-78-4 250mg Alphaprodine Hydrochloride CII
鹽酸阿夫唑嗪標(biāo)準(zhǔn)品 81403-68-1 150mg Alfuzosin Hydrochloride
鹽酸阿可樂(lè)定標(biāo)準(zhǔn)品 73218-79-8 100mg Apraclonidine Hydrochloride
鹽酸阿米洛利標(biāo)準(zhǔn)品 17440-83-4 500mg Amiloride Hydrochloride
ELISA試劑盒進(jìn)口大鼠