ELISA試劑盒操作步驟
①、配液:將50ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋至1000ml備用。
②、編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板設(shè)陰性對(duì)照3孔、陽性對(duì)照Ⅰ型、Ⅱ型各1孔,空白對(duì)照1孔。人ELISA試劑盒
③、加樣:分別在相應(yīng)孔加入待檢標(biāo)本、陰性、陽性對(duì)照100μl,用封板膜封板后置37℃溫育30min。人ELISA試劑盒
④、洗滌:小心把封板膜揭去,用洗板機(jī)選擇5次程序,洗板后拍干。
⑤、加酶:每孔加酶結(jié)合物100μl(空白對(duì)照孔除外),充分混勻,用封板膜封板后置37℃溫育30min。
⑥、洗滌:小心把封板膜揭去,用洗板機(jī)選擇5次程序,洗板后拍干。。
⑦、顯色:每孔加入顯色劑A液和B液各50μl,輕輕振蕩混勻,封板后置37℃避光顯色15min。
⑧、測定:每孔加終止液50μl,輕輕振蕩混勻。設(shè)定酶標(biāo)儀波長為450nm(建議使用雙波長的酶標(biāo)儀比色,參考波長630 nm),空白調(diào)零,讀取各孔OD值。
⑨、判斷結(jié)果:計(jì)算臨界值(cut-off)(CO)值。
臨界值=陰性對(duì)照A均值+0.12
正常情況下,陰性對(duì)照孔的OD值≤0.10(若1孔陰性對(duì)照的OD值>0.1應(yīng)舍棄,若有2孔或2孔以上陰性對(duì)照的OD值>0.1,應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。)。樣品OD值<臨界值者為HIV抗體陰性。
正常情況下,陽性對(duì)照孔的OD值≥0.80(若1孔陽性對(duì)照的OD值<0.8應(yīng)舍棄,若有2孔或2孔以上陽性對(duì)照的OD值<0.8,應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。樣品OD值≥臨界值者為HIV抗體陽性。
注意:對(duì)于篩查陽性標(biāo)本,應(yīng)重新取樣雙孔復(fù)試,復(fù)試陽性者應(yīng)按照《全國HIV檢測管理規(guī)范》送HIV確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)。
質(zhì)量控制:
每塊板設(shè)陰陽性及空白對(duì)照,并于每次試驗(yàn)用自制質(zhì)控血清作質(zhì)控,將質(zhì)控血清孔OD值采用“即刻法"計(jì)算或標(biāo)在質(zhì)控圖上,如質(zhì)控有效,表明試驗(yàn)可靠;如失控,則要檢查試劑效期、儲(chǔ)藏溫度、試驗(yàn)溫度是否正常、操作步驟是否正確,直至重新試驗(yàn)使其在控。
干擾和交叉反應(yīng)
生物參考區(qū)間
正常人陰性
患者檢驗(yàn)結(jié)果的可報(bào)告區(qū)間
ELISA試劑盒陽性表示HIV病毒感染.
臨床意義:
用于HIV感染的輔助診斷,抗HIV藥物治療的效果的監(jiān)測。