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elisa試劑盒白介素類干擾因素的研究
更新時間:2018-02-28   點擊次數(shù):950次

elisa試劑盒白介素類應用價值。
(2)改變酶標抗體:由于RF結合的是IgG的Fc片段,如果將待酶標的抗體的F,片段酶切去除,僅留下具有特異結合功能的F(ab’)2部分標記酶,則在測定中即可避免RF的干擾。
(3)標本中RF用變性IgG預先封閉:將經(jīng)熱變性(63℃,10 min)的動物如兔、羊等的IgG加入到標本稀釋液中,或是將該變性IgG連接至一顆粒固相如聚苯乙烯微球或微孔,然后加入臨床血清標本,反應后,再吸出標本進行檢測。此外,在測定特異IgM時,也可使用抗人IgG去除臨床標本中RF和IgG。
(4)測定抗原時,可在標本中加入可使RF降解的還原劑:如2—巰基乙醇。2—巰基乙醇等還原劑可使抗體內(nèi)的巰基裂解,因而可以去除RF的干擾,但只適用于抗原測定。
(5)包被或酶標二抗使用特異的雞抗體IgY:RF不與雞IgY反應,如果包被和酶標二抗均為雞IgY抗體,則不受標本中RF的干擾。
2.補體 在固相酶免疫測定中,來自哺乳動物的固相特異抗體和酶標二抗均有激活人補體系統(tǒng)的功能。一方面,固相抗體和酶標二抗可因為其在固相吸附及結合過程中,抗體分子發(fā)生變構,從而其F,段的補體C1,結合位點被暴露出來,這樣C1,就成為一個中介物將二者交聯(lián)起來,從而出現(xiàn)假陽性結果。另一方面,固相抗體也會因為活化補體的結合,封閉抗體的抗原表位結合能力,而引起假陰性結果或使定量測定結果偏低。由補體引起的干擾可通過下述方法避免:
(1)對臨床血清標本加熱滅活補體:采用56~C30 min加熱可使標本中的補體C1。滅活。
(2)包被或酶標二抗使用特異的雞抗體:雞抗體不激活人的補體系統(tǒng),因此,使用特異的雞抗體,不會出現(xiàn)因補體激活而存在的假陽性和假陰性干擾。
3.異嗜性抗體(heterophilieantibodies) 人類血清中含有抗嚙齒類動物(如鼠、馬、羊等)
的免疫球蛋白(1g)的抗體,即天然的異嗜性抗體。有研究表明,天然的異嗜性抗體(1gG)可分為兩類,一類(85%的假陽性由其引起)可結合于山羊、小鼠、大鼠、馬和牛IgG的Fab區(qū)域,但不與兔IgG的Fab區(qū)結合。另一類(15%的假陽性由其引起)可結合于小鼠、馬、牛和兔IgG的Fc區(qū)表位,但不與山羊和大鼠IgG的Pc區(qū)表位結合。異嗜性抗體可通過交聯(lián)固相和酶標的單抗或多抗而出現(xiàn)假陽性反應。由異嗜性抗體引起的干擾可通過下述方法避免:
(1)使用特異的兔F(ab’)2。片段作為固相或測定酶標抗體。
(2)在標本或標本稀釋液中加入過量的動物Ig,封閉可能存在的異嗜性抗體。但加入量不足或亞類不同時無效。
(3)使用靶特異的非Ig親和蛋白(affibody)替代固相或酶標抗體之一。采用噬菌體展示技術展示來自單個金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)聯(lián)合文庫的人IgA結合親和蛋白,用于IgA的測定,不受異嗜性抗體的影響。
(4)使用elisa試劑盒白介素類特異的雞抗體作為固相和測定抗體。
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