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革蘭氏染色液染色法
更新時間:2016-02-29   點(diǎn)擊次數(shù):1418次

    革蘭氏染色液染色法是細(xì)菌學(xué)中zui廣泛使用的一種鑒別染色法。1884 年 由丹麥醫(yī)師 Gram 創(chuàng)立。方法是先將細(xì)菌用結(jié)晶紫染色,加媒染劑(增加染料和細(xì)胞的親和力)后,用脫色劑(酒精或丙酮)脫色,再用復(fù)染劑染色。如果細(xì)菌 不被脫色而保存原染液顏色者為革蘭陽性菌(G+);如被脫色,而染上復(fù)染液的顏 色者為革蘭陰性菌(G-)。此染色法可將所有具有細(xì)胞壁的細(xì)菌分為兩大類:革蘭 陽性菌和革蘭陰性菌。
 
    單染色法:只能觀察微生物的大小、形狀、和細(xì)胞排列狀況,但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。

    復(fù)染色法:用兩種或兩種以上染色液進(jìn)行染色,有協(xié)助鑒別微生物的作用,故也稱鑒別染色法。常用的有:革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。
 
    染色原理: 現(xiàn)在認(rèn)為細(xì)菌對革蘭染色的不同反應(yīng)主要是革蘭陽性菌和陰性菌 的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)與化學(xué)組成不同。革蘭陽性菌的細(xì)胞壁較厚,肽聚糖含量多,且交 聯(lián)度大,脂類含量少,經(jīng)95%乙醇脫色時,肽聚糖層的孔徑變小,通透性降低,與細(xì)胞結(jié)合的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物不易被脫掉,因此細(xì)胞仍保留初染時的顏色。而革蘭陰性菌的細(xì)胞壁較薄,含有較多的類脂質(zhì),而肽聚糖的含量較少,乙醇脫 色時溶解外層類脂質(zhì),增加了細(xì)胞壁的通透性,使初染的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易 于滲出,結(jié)果細(xì)胞被脫色,經(jīng)復(fù)染后,又染上復(fù)染的顏色。
 
1. 革蘭氏染色 

(1)涂片

(2)初染:在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液,染1分鐘,傾去染液,流水沖洗至無紫色。

(3)媒染:先用新配的路哥氏碘液沖去殘水,而后用其覆蓋涂面1分鐘,后水洗。

(4)脫色:除去殘水后,滴加95%酒精進(jìn)行脫色約15-20秒,后立即用流水沖洗。

(5)復(fù)染:滴加番紅染色液,染3-5分鐘,水洗后用吸水紙吸干。

(6)鏡檢:觀察染色結(jié)果并繪圖。

2. 染色過程:涂片(大腸桿菌和金黃色葡萄球菌)→干燥→固定→初染(結(jié)晶 染色過程: 紫染色 1min)→媒染(碘 1min)→水洗→95%乙醇脫色(1min)→復(fù)染(番紅花 紅染色 1min)→干燥→鏡檢(油鏡)

3. 油鏡的使用與保養(yǎng)

(1)在需觀察部位的玻片上滴加一滴香柏油,然后慢慢轉(zhuǎn)動油鏡,在轉(zhuǎn) 換油鏡時,從側(cè)面水平注視鏡頭與玻片的距離,使鏡頭浸入油中而 又不以壓破載玻片為宜。 

(2)用雙眼觀察目鏡,并慢慢轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)器至出現(xiàn)模糊物象,然后用細(xì)調(diào)節(jié)器至物象清晰為止。 

(3)如果不出現(xiàn)物象或者目標(biāo)不理想要重找。細(xì)胞

4)油鏡使用完畢,先用擦鏡紙沾少許乙醇將鏡頭上和標(biāo)本上的香柏油 擦去,然后再用干擦鏡紙擦干凈。

 

 

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