Lowicryls:Lowicryls是丙烯酸鹽(acrylate)和甲基丙烯酸鹽(methacrytate)化學(xué)物質(zhì),包括K4M、K11M、KM23等。其主要特點是在低溫下(K4M:一35℃;K1tM和KM23:-60~-80℃)仍保持低黏度,并具有在紫外光(波長360nm)照射下聚合的能力。這種光聚合作用與溫度無關(guān),但實驗中為保持包埋劑的低黏稠度,以利于其向組織細胞內(nèi)滲透,要求在低溫下照射。在這些包埋劑中,K4M和K11M具有親水性,能較好地保持組織細胞的微細結(jié)構(gòu)和抗原性,特別適于免疫細胞化學(xué)染色,且背景染色低,是超微結(jié)構(gòu)定位組織細胞抗原的良好包埋劑。KM23為疏水性,圖像反差好,較適于掃描電鏡和透射電鏡的暗視野觀察標(biāo)本制作。
包埋劑的配制:商品Lowicryls包埋劑由三部分組成,即單體(monomer)、交聯(lián)劑(crosslinker)和引發(fā)劑(initiator)。調(diào)整單體和交聯(lián)劑的比例,可制備軟硬度合適的包埋塊(包埋時多用硅膠囊代替橡膠或塑料制品,后兩者影響紫外線的吸收)。配制比例
K4M 8.65g l7.30g 25.95g 34.6g
交聯(lián)劑 1.35g 2.70g 4.05g 5.4g
引發(fā)劑 0.05g 0.10g 0.15g 0.20g
合計 10.05g 20.10g 30.15g 40.20g
一般可分別用注射器取包埋劑,置于玻璃燒杯內(nèi),天平稱量,將三者按順序加入后用玻璃棒輕輕攪動3~5分鐘。切忌過分用力攪拌,以防產(chǎn)生氣泡,影響包埋效果。細胞