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蛋白胨神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)方法
更新時間:2014-07-09   點(diǎn)擊次數(shù):648次

蛋白胨神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)方法

蛋白胨神經(jīng)細(xì)胞(神經(jīng)元〕不易培養(yǎng),只有在適宜情況下,如接種在膠原底層上,或加入神經(jīng)生長因子和膠質(zhì)細(xì)胞因子時,可出現(xiàn)一定程度的分化,長出突起等現(xiàn)象,但很難使之增值。而神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)組織中比較容易培養(yǎng)的成分。

蛋白胨神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)方法如下:

    1、從手術(shù)室無菌取腦髓灰質(zhì)或白質(zhì)后,仔細(xì)剝除腦膜、血管和纖維成分,置Hanks液中漂洗一、二次。

    2、置于30—50倍體積的Hanks液中,此時腦組織比較柔軟,反復(fù)吹打即制成細(xì)胞懸液。

    3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后,細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)快自然下沉,脂肪等雜物易漂浮,可吸除上層、反復(fù)二、三次,即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細(xì)胞成分。

    4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液,通過紗網(wǎng)成紗布過濾,計數(shù)并調(diào)整細(xì)胞密度。

    5、接入培養(yǎng)瓶或皿中,置5%CO2溫箱中培養(yǎng)。

    該細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境過程較長,接種后貼壁較慢。貼壁后短期內(nèi)也可能不見細(xì)胞分裂現(xiàn)象,然而一旦生長后即能迅速進(jìn)入旺盛的增殖狀態(tài)。細(xì)胞傳代可以0.25%胰酶消化處理。

 

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