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酶聯(lián)法檢測人類免疫缺陷病毒
更新時間:2011-12-27   點擊次數(shù):2265次

酶聯(lián)法檢測人類免疫缺陷病毒
[測定方法] ELISA法
[方法學原理] 在微孔板上預包被高純度基因重組HIV(1型十Ⅱ型),與樣品中抗HIV抗體反應,同時加入HRP標記HIV(1型+Ⅱ型)抗原。然后用TMB底物作用顯色。通過酶標儀檢測吸光度(OD值)從而判定樣品中HIV抗體的存在與否。
[標本準備] 靜脈抽血2ml,不抗凝
[試劑]
1.預包被微孔反應板條
2.酶標試劑
3.陰性對照
4.陽性對照
5.洗滌液
6.顯色劑A、B
[儀器設備] 酶標儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。
[測定步驟]
1.將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照3孔,陽性對照2孔,空白1孔。
2.每孔加人酶標試劑100~1,空白孔除外。
3.分別在相應孔中加入待測樣品或陰性對照、陽性對照20ul,振蕩混勻。37℃環(huán)境中溫育60min。
4.棄去孔內液體,用洗滌液充分洗滌6遍,zui后一次盡量拍干。
5.每孔加人顯色劑A、B液各50u1,輕輕振蕩混勻,置37℃環(huán)境中避光顯色10min。
6.每孔加終止液50gl,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀波長450nm(建議用雙波長檢測)測定各孔吸光度。
7.結果判定 樣品OD值≥臨界值(cut off)者為HIV抗體初篩陽性(注意:初篩陽性標本應重新取樣品進行雙孔復試,復試陽性者應按“全國HIV檢測管理規(guī)范”送HIV確認實驗室進行確認試驗)。樣品OD值<臨界值(cutoff)者為HIV抗體陰性。
[注意事項]
1.檢測單位必須是經當?shù)匦l(wèi)生行政部門批準的HIV初篩實驗室。
2.檢測必須符合HIV實驗室管理規(guī)范和生物安全守則的規(guī)定,嚴格防止交叉污染。操作時必須戴手套、穿工作服,嚴格健全地執(zhí)行消毒隔離制度。所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,終止液為2mol/L硫酸,使用時必須注意安全。
3.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出同時應置室溫環(huán)境中平衡30min后方可使用,未用完的微孔條密封保存。
4.加液時必須用加液器,并經常校對加液器的準確性。
5.洗滌時各孔均需加滿洗滌液,防止孔內有游離酶不能洗凈。使用洗板機洗滌應設定30~60s浸泡時間。
6.HIV抗體檢測結果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,建議用雙波長450/630nm檢測。
7.操作應按說明書嚴格進行,不同批次試劑不得混用。
[臨床意義] ELISA法HIVI型+Ⅱ型抗體陽性提示可能為HIV感染,但須經有關部門確認并須結合流行病學史和現(xiàn)病史診斷,同時送有國家認可資格的確認實驗室進行確認。
 

 

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