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鰓霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒反應(yīng)五要素
更新時(shí)間:2022-03-31   點(diǎn)擊次數(shù):770次

鰓霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒反應(yīng)五要素:


參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+


引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:


①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。


②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。


③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。


⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。


⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。


⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。


引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

AKIRIN2蛋白抗體

ADP核糖基化樣因子8B抗體

三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗體

AKIRIN1蛋白抗體

錨定蛋白樣蛋白1抗體

腺苷酸激酶2抗體

黑色素瘤缺失樣蛋白1抗體

未知糖基化轉(zhuǎn)移酶AER61抗體

鐵蛋白Fe65抗體

抑癌基因ras同源家族1抗體

轉(zhuǎn)錄激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗體

心鈉素抗體

丙氨酰tRNA合成酶2抗體

絲氨酸抑制蛋白激酶C底物抗體

核突觸蛋白α抗體

自噬相關(guān)蛋白4B抗體

整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-12抗體

α-輔肌動(dòng)蛋白4(內(nèi)參)抗體

堿性磷酸酶抗體

AU1 tag標(biāo)簽抗體

脂肪細(xì)胞增強(qiáng)結(jié)合蛋白1

蛋白激酶B

蛋白激酶B

血管生成素樣蛋白2抗體

血管生成素3/血管生成素4抗體

膜粘連蛋白 I抗體

膜粘連蛋白 Ⅱ抗體

活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體

水通道蛋白4抗體


 

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