人熱休克蛋白90(HSP-90)Elisa試劑盒實驗步驟:
1. 分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl;在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。人熱休克蛋白90(HSP-90)每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動混勻,37℃溫育60分鐘。
2. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。
3.人熱休克蛋白90(HSP-90)每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
4.取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
5.人熱休克蛋白90(HSP-90)測定:以空白孔調零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
6.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,人熱休克蛋白90(HSP-90)再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。